|
การทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนจาก Bacillus subtilis N3 ที่มีฤทธิ์ต้านราก่อโรคพืช Bipolaris sp. |
|---|---|
| รหัสดีโอไอ | |
| Title | การทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนจาก Bacillus subtilis N3 ที่มีฤทธิ์ต้านราก่อโรคพืช Bipolaris sp. |
| Creator | สุดารัตน์ นุชวงษ์ |
| Contributor | ปาหนัน เริงสำราญ |
| Publisher | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย |
| Publication Year | 2556 |
| Keyword | สารต้านเชื้อรา, โรคเกิดจากเชื้อราในพืช, ข้าวโพด, Antifungal agents, Fungal diseases of plants, Corn |
| Abstract | แบคทีเรีย B. subtilis N3 ที่คัดแยกได้จากดินสามารถผลิตโปรตีนที่มีฤทธิ์ในการยับยั้งรา Bipolaris sp. ที่ก่อโรคใบไหม้แผลเล็กในข้าวโพดได้ โดยวัตถุประสงค์ของงานวิจัยนี้คือการแยกและทำบริสุทธิ์โปรตีนที่มีฤทธิ์ในการยับยั้งราก่อโรคพืชจากน้ำเลี้ยงเชื้อของแบคทีเรียที่เลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อ Tryptic soy broth ที่ pH 7.5 และบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18 ชั่วโมง ผลการทดลองพบว่าน้ำเลี้ยงเชื้อมีประสิทธิภาพในการยับยั้งราก่อโรคพืชได้ดี โดยมีเปอร์เซ็นต์การยับยั้งประมาณ 65 เปอร์เซ็นต์ และมีค่าแอกทิวิตีจำเพาะเท่ากับ 79.08 AUต่อมิลลิกรัมของโปรตีน โปรตีนที่มีฤทธิ์ในการยับยั้งราก่อโรคพืชสามารถแยกและทำบริสุทธิ์ได้ โดยการตกตะกอนโปรตีนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตที่ช่วงความเข้มข้น 40-80% ของแอมโมเนียมซัลเฟต โดยมีเปอร์เซ็นต์การยับยั้งเท่ากับ 80% และมีค่าแอกทิวิตีจำเพาะเท่ากับ 118.18 AUต่อมิลลิกรัมของโปรตีน จากนั้นทำบริสุทธิ์โปรตีนด้วยวิธีแอนไอออนเอกซ์เชนจ์ด้วยไดเอธิลอะมิโนเอธิล (DEAE Bio-gel A) โดยโปรตีนที่ผ่านการทำบริสุทธิ์ในช่วงลำดับส่วนที่ 45-50 (ตัวอย่างที่ 38) มีเปอร์เซ็นต์การยับยั้งเท่ากับ 62% และมีค่าแอกทิวิตีจำเพาะเท่ากับ 159.61 AUต่อมิลลิกรัมของโปรตีน เมื่อผ่านการทำโซเดียมโดเดซิลซัลเฟตพอลิอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโทรฟอเรซิสพบว่ามีแถบโปรตีนเพียงแถบเดียว ซึ่งมีน้ำหนักโมเลกุลประมาณ 34.61 kDa จากการวิเคราะห์ด้วยวิธี Liquid Chromatography Quadrupole Time-of-Flight Tandem Mass Spectrometry พบว่ามีลายพิมพ์เพปไทด์ใกล้เคียงกับโปรตีนแฟลกเจลลินที่ผลิตจาก Bacillus amyloliquefacien subsp. plantarum โดยมีคะแนนความเหมือนของลำดับเพปไทด์เท่ากับ 52% นอกจากนี้เมื่อศึกษาลักษณะของสายใยและสปอร์ราก่อโรคพืชภายใต้กล้องจุลทรรศน์พบว่าโปรตีนที่แยกและทำบริสุทธิ์ได้สามารถยับยั้งการเจริญและการงอกของสปอร์ราก่อโรคพืช โดยความเข้มข้นของโปรตีนที่สามารถยับยั้งการเจริญของราก่อโรคพืชได้ 50% (IC50) มีค่าเท่ากับ 0.045 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร นอกจากนี้โปรตีนที่แยกและทำบริสุทธิ์ได้สามารถป้องกันการรุกรานของรา Bipolaris sp. ที่ก่อโรคในใบข้าวโพดได้มากกว่า 89% ดังนั้นจากงานวิจัยนี้พบว่าโปรตีนที่แยกและทำบริสุทธิ์ได้จากแบคทีเรีย B. subtilis N3 สามารถนำไปประยุกต์ใช้ในการควบคุมปัญหาโรคใบไหม้แผลเล็กในข้าวโพดที่มีสาเหตุจากรา Bipolaris sp. ได้ |
| URL Website | cuir.car.chula.ac.th |
