|
การผลิตและกิจกรรมของรีคอมบิแนนท์เอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสจาก Streptococcus pyogenes ATCC 6550 ใน Escherichia coli JM 109 |
|---|---|
| รหัสดีโอไอ | |
| Title | การผลิตและกิจกรรมของรีคอมบิแนนท์เอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสจาก Streptococcus pyogenes ATCC 6550 ใน Escherichia coli JM 109 |
| Creator | สิทธิศักดิ์ เถาสุวรรณ |
| Contributor | ชุติมณฑน์ สถิรพิพัฒน์กุล, ศรีเมฆ ชาวโพงพาง |
| Publisher | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย |
| Publication Year | 2555 |
| Keyword | สเตรปโตค็อกคัสไพโอจีเนส, อาหารเลี้ยงเชื้อ, เอนไซม์, Streptococcus pyogenes, Enzymes, Culture media (Biology) |
| Abstract | การศึกษาการแสดงออกของยีนไฮยาลูโรนิเดส จาก Streptococcus pyogenes ATCC 6550 ใน Escherichia coli JM109 เมื่อใช้ pQE80-L vector system พบว่า มีขนาดของยีนประมาณ 2,400 คู่เบส โดยรีคอมบิแนนท์โปรตีนทำการตรวจสอบขนาดโมเลกุลด้วยเทคนิค SDS-PAGE พบว่าในสารละลายเซลล์มีขนาดโมเลกุลประมาณ 88 กิโลดาลตัน โดยเอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสที่แยกได้จากสารละลายตะกอนเซลล์ ถูกตรวจวัดได้ในระดับที่สูงกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับเอนไซม์จาก supernatant เมื่อทำการศึกษาปัจจัยที่มีผลต่อการเลี้ยงของการผลิตเอนไซม์ไฮยาลูโรนิเดสโดยเชื้อสายพันธุ์นี้ในระดับขวดเขย่า พบว่า สภาวะที่เหมาะสมต่อการเพาะเลี้ยงเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อ 2xYT ที่มีปริมาตรของอาหารเลี้ยงเชื้อต่อปริมาตรขวดเขย่า 40 เปอร์เซ็นต์ คือ ที่อุณหภูมิ.35 องศาเซลเซียส ที่ค่าความเป็นกรด-ด่าง 8 และ 200 รอบการเขย่าต่อนาที สารละลายเอนไซม์ที่ไม่ทำให้บริสุทธิ์ แสดงค่ากิจกรรมสูงสุดในช่วงอุณหภูมิ 35.ถึง.40 องศาเซลเซียส ที่ค่าความเป็นกรด-ด่าง 7 การศึกษาจลนพลศาสตร์ของเอนไซม์ที่สภาวะค่าความเป็นกรด-ด่าง 7 และอุณหภูมิ.37 องศาเซลเซียส ด้วยวิธี Morgan-Elson colourimetric assay พบว่า Km และ Vmax มีค่าเท่ากับ 0.78 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร และ 9.3 มิลลิยูนิตต่อมิลลิลิตร จาก Lineweaver–Burk plot |
| URL Website | cuir.car.chula.ac.th |
