|
การพัฒนาวิธีการตรวจสอบออโตอินดิวเซอร์ 2 ที่สร้างจาก Salmonella Typhimurium โดยอาศัยปฏิกิริยาเคมี |
|---|---|
| รหัสดีโอไอ | |
| Title | การพัฒนาวิธีการตรวจสอบออโตอินดิวเซอร์ 2 ที่สร้างจาก Salmonella Typhimurium โดยอาศัยปฏิกิริยาเคมี |
| Creator | ศิริลักษณ์ วัฒนวาณิชกร |
| Contributor | ชื่นจิต ประกิตชัยวัฒนา, พัชณิตา ธรรมยงค์กิจ |
| Publisher | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย |
| Publication Year | 2552 |
| Keyword | ซาลโมเนลลาทัยฟี, พันธุศาสตร์จุลชีพ, Salmonella typhi, Microbial genetics, Quorum sensing (Microbiology) |
| Abstract | งานวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อประเมินวิธีการตรวจสอบสัญญาณ AI-2 ที่สร้างจาก S. Typhimurium อย่างง่ายโดยอาศัยปฏิกิริยาเคมี เริ่มต้นจากการพิสูจน์การสร้าง AI-2 ของจุลินทรีย์ที่ใช้ในการทดลอง โดยตรวจสอบสารชะโคโลนีของจุลินทรีย์ที่สร้างและไม่สร้าง AI-2 โดยวิธี 1H-NMR พบว่าสเปกตรัม 1H-NMR ของ S. Typhimurium และ Vibrio parahaemolyticus ซึ่งเป็นจุลินทรีย์ที่สร้าง AI-2 มีความคล้ายคลึงกันแต่แตกต่างกับสเปกตรัมของ Sinorhizobium meliloti ซึ่งเป็นจุลินทรีย์ที่ไม่สร้าง AI-2 และเมื่อทดสอบด้วยวิธีทางชีวภาพพบว่าสารชะโคโลนีของจุลินทรีย์ที่สร้าง AI-2 นั้นเหนี่ยวนำการเรืองแสงของ Vibrio harveyi BAA-1117 ในขณะที่สารชะโคโลนีของจุลินทรีย์ที่ไม่สร้าง AI-2 นั้นไม่เหนี่ยวนำการเรืองแสง ซึ่งบ่งชี้ว่าในสารชะโคโลนีของจุลินทรีย์ที่สร้าง AI-2 มี AI-2 ละลายอยู่ เมื่อประเมินการตรวจสอบสัญญาณ AI-2 ที่จุลินทรีย์สร้างขึ้นด้วยการทำปฏิกิริยาเคมี พบว่าการทำปฏิกิริยา metal ion reduction โดยใช้ Fe(III)-1,10-phenanthroline พบว่าสารนี้จะทำปฏิกิริยากับสารในสารชะโคโลนี และสารในคัลเจอร์ของจุลินทรีย์ที่สร้าง AI-2 จะให้ผลิตภัณฑ์ที่เป็นสารประกอบสีที่มีค่าการดูดกลืนแสงสูงสุดที่ 510 นาโนเมตร ในขณะที่สารชะโคโลนี และคัลเจอร์ของ S’bium. meliloti ไม่มีผลิตภัณฑ์ที่มีสมบัติการดูดกลืนแสงดังกล่าว จึงใช้ปฏิกิริยานี้มาประเมินใช้ในการตรวจสอบ AI-2 ที่สร้างจากแบคทีเรียเพื่อพัฒนาเป็นวิธีทางสเปกโตรโฟโตเมทรีในการทดลองต่อไป เมื่อตรวจสอบสมบัติการสร้าง AI-2 ที่ตรวจวัดในค่า OD510 ของ S. Typhimurium จำนวน 4 สายพันธุ์ รวมทั้ง Escherichia coli Staphylococcus aureus และ V. parahaemolyticus อย่างละ 1 สายพันธุ์ ด้วยวิธีทางสเปกโตรโฟโตเมทรี พบว่ามีความสอดคล้องกับการตรวจสอบด้วยวิธีทางชีวภาพ นอกจากนี้ผลการศึกษายังบ่งชี้ว่าองค์ประกอบในอาหารเลี้ยงเชื้อ และเมทาบอไลต์อื่นๆไม่รบกวนปฏิกิริยา metal ion reduction ในระบบที่ทดสอบ จึงยืนยันได้ว่าสารประกอบสีที่เกิดขึ้นนั้นน่าจะเกิดจากการทำปฏิกิริยาจำเพาะระหว่าง Fe(III)-1,10-phenanthroline กับ AI-2 ดังนั้นจึงนำวิธีทาง สเปกโตรโฟโตเมทรีมาประยุกต์ใช้ในการศึกษาปัจจัยที่เกี่ยวข้องกับสมบัติการสร้าง AI-2 ของ S. Typhimurium เปรียบเทียบกับงานวิจัยก่อนหน้า และวิธีทางชีวภาพ พบว่าผลการทดลองที่ได้มีความสอดคล้องกับงานวิจัยก่อนหน้า และวิธีทางชีวภาพ เมื่อศึกษาเพิ่มเติมถึงความสัมพันธ์ระหว่าง AI-2 กับการแสดงออกทางฟีโนไทป์ของ S. Typhimurium พบว่า AI-2 (OD510) ที่สร้างจาก S. Typhimurium ไม่มีบทบาทเกี่ยวข้องกับการสร้างฟิล์มชีวภาพ และการเหนี่ยวนำการเจริญ ในการศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างจำนวนประชากรกับปริมาณการสร้าง AI-2 ทั้งในระบบ อาหารเหนี่ยวนำการสร้าง AI-2 และ selective medium ผลการทดลองที่ได้บ่งชี้ว่า S. Typhimurium ทุกสายพันธุ์จะสร้าง AI-2 (OD510) สูงสุดตามจำนวนประชากรสูงสุดที่มีอยู่ในระบบ และเวลาที่ตรวจพบ AI-2 (OD510) สูงสุดจะขึ้นอยู่กับอัตราการเจริญของ S. Typhimurium แต่ละสายพันธุ์ |
| URL Website | cuir.car.chula.ac.th |
