|
ภาวะที่เหมาะสมของภาวะการเลี้ยงเชื้อเพื่อผลิตซีโครปิน เอ ในรีคอมบิแนนต์ Pichia pastoris |
|---|---|
| รหัสดีโอไอ | |
| Title | ภาวะที่เหมาะสมของภาวะการเลี้ยงเชื้อเพื่อผลิตซีโครปิน เอ ในรีคอมบิแนนต์ Pichia pastoris |
| Creator | ปรีรญา สิงห์ไข่มุกข์ |
| Contributor | ศรินทิพ สุกใส, กิตตินันท์ โกมลภิส |
| Publisher | จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย |
| Publication Year | 2558 |
| Keyword | เปปไทด์ต้านจุลชีพ, สารต้านจุลชีพ, สารยับยั้ง, Peptide antibiotics, Chemical inhibitors |
| Abstract | ซีโครปิน เอ (cecropins A, CA) เป็นเพปไทด์ต้านจุลินทรีย์ที่พบในระบบภูมิคุ้มกันในน้ำเลือด (immune hemolymph) ของผีเสื้อกลางคืน Hyalophora cecropia มีฤทธิ์ฆ่าจุลินทรีย์ได้ทั้งแกรมบวก และ แกรมลบ รวมถึงมีฤทธิ์ในการยับยั้งการเกิดเนื้องอกและต้านเซลล์มะเร็ง อย่างไรก็ตามการสกัด ซีโครปิน เอ จากผีเสื้อกลางคืนทำได้ยากเนื่องจากจะมีการปนเปื้อนของโปรตีนที่ไม่ต้องการ ดังนั้นในงานวิจัยนี้จึงศึกษาการผลิตซีโครปิน เอ ในระบบของยีสต์ P. pastoris โดยทำการศึกษาใน ยีสต์ P. pastoris 3 สายพันธุ์ คือ X33 (Mut+), GS115 (Mut+ His-) และ KM71H (MutS) และหาภาวะที่เหมาะสมในการผลิต ด้วยเทคนิค Real time PCR พบว่า ยีสต์ทั้ง 3 สายพันธุ์ มีระดับการแสดงออกของยีน (gene expression) ที่ดีที่สุดในภาวะ ค่ากรด -ด่างที่ 6 อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส และ ระดับความเข้มข้นของเมทานอล 0.5 เปอร์เซ็นต์ รีคอมบิแนนต์ซีโครปิน เอ ที่ผลิตได้ถูกนำมาทำให้บริสุทธิ์โดยใช้คอลัมน์โครมาโตกราฟีแบบแยกตามความจำเพาะโดยใช้คอลัมน์ฮีสแทรบฟาสท์โฟลว์ (His trap Fast Flow) ซึ่งมีความจำเพาะกับรีคอมบิแนนต์ซีโครปิน เอ ที่ต่อด้วยฮีสธิดีน จากนั้นตรวจสอบปริมาณการผลิตรีคอมบิแนนต์โปรตีนซีโครปิน เอ ใน P. pastoris 3 สายพันธุ์ ที่เลี้ยงที่ภาวะดังกล่าว เป็นเวลา 24 ชั่วโมง พบว่า P. pastoris สายพันธุ์ KM71H และ GS115 มีความสามารถในการผลิตซีโครปิน เอ ได้ใกล้เคียงกัน คือ 4.64 และ 4.29 มิลลิกรัมต่อลิตร ตามลำดับ ส่วน X33 ผลิตได้เพียง 2.79 มิลลิกรัมต่อลิตร |
| URL Website | cuir.car.chula.ac.th |
