|
Cloning and expression of catalase genes from rice Oryza sativa L. in Escherichia coli Rosetta-gami |
|---|---|
| รหัสดีโอไอ | |
| Title | Cloning and expression of catalase genes from rice Oryza sativa L. in Escherichia coli Rosetta-gami |
| Creator | Suntareeya Boonkomrat |
| Contributor | Nuchanat Wutipraditkul, Teerapong Buaboocha |
| Publisher | Chulalongkorn University |
| Publication Year | 2553 |
| Keyword | Oryza sativa L., Catalase, Escherichia coli Rosetta-gami |
| Abstract | แคทาเลสเป็นหนึ่งในเอนไซม์ที่สำคัญในระบบการกำจัดออกซิเจนที่ไวต่อปฏิกิริยาของสิ่งมีชีวิตที่หายใจแบบใช้ออกซิเจน ในพืชพบแคทาเลสในส่วนเพอรอกซิโซมทำหน้าที่กำจัดไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ให้อยู่ในรูปของออกซิเจนและน้ำ ในข้าว Oryza sativa L. พบแคทาเลสอย่างน้อย 3 ไอโซฟอร์ม ในงานวิจัยนี้ได้ศึกษาลักษณะของยีนทั้งสาม คือ OsCatA, OsCatB และ OsCatC จากข้าว Oryza sativa L. โดยการสร้างพลาสมิดรีคอมบิแนนต์ของยีนดังกล่าวในเวกเตอร์ pET-21a (+) และส่งถ่ายเข้าสู่เซลล์ E. coli สายพันธุ์ Rosetta-gami หลังจากเหนี่ยวนำให้เกิดการสร้างโปรตีนด้วยการเติม IPTG พบโปรตีนรีคอมบิแนนท์ของ OsCAT ทั้งสามอยู่ในส่วนของอินคลูชันบอดี ที่สามารถละลายด้วยฟอสเฟตบัพเฟอร์ pH 12.0 โปรตีนที่ได้มีขนาด 58.8, 58.7 และ 58.9 kDa ตามลำดับ หลังผ่านการตรวจสอบด้วย SDS-PAGE และ Western blot และเมื่อนำโปรตีนมาผ่านการทำให้บริสุทธิ์บางส่วนด้วยคอลัมน์นิกเกิล พบแอกทิวิตีของ OsCATA, OsCATB และ OsCATC เท่ากับ 54.9, 130.8 and 5.4 µmol/min/mg ตามลำดับ โดยมีความบริสุทธิ์เพิ่ม 4, 2.2 และ 2.2 เท่าตามลำดับ ค่า Km เท่ากับ 80.0, 66.67 และ 40 mM ตามลำดับ และมีค่า kcat ของ OsCATA, OsCATB และ OsCATC เท่ากับ 6.60 x 10-3, 20.0 x 10-3 และ 0.60 x 10-3 min-1 ตามลำดับ ส่วนpHและอุณหภูมิที่เหมาะสมในการเร่งปฏิกิริยาของ OsCATA คือ 8.0 และ 30 องศาเซลเซียส ตามลำดับ, OsCATB คือ 7.5 และ 25 องศาเซลเซียส ตามลำดับ และ OsCATC คือ 7.0 และ 30 องศาเซลเซียส ตามลำดับ และผลของเกลือโซเดียมคลอไรด์ต่อแอกทิวิตีของโปรตีนรีคอมบิแนนท์ OsCATs พบว่าโปรตีน OsCAT ทุกชนิดถูกยับยั้งเมื่อเพิ่มความเข้มข้นของเกลือโซเดียมคลอไรด์ลักษณะเดียวกับแอกทิวิตีของเอนไซม์ที่ได้จากต้นข้าว |
| URL Website | cuir.car.chula.ac.th |
